TRATAMIENTOS GENÉTICOS

TERAPIA GÉNICA PARA ENFERMEDADES HEPÁTICAS

Una modalidad de terapia génica antineoplásica es la eliminación de células tumorales mediante sistemas de sensibilización a fármacos que generan localmente metabolitos tóxicos a través de reacciones enzimáticas. Este abordaje terapéutico utiliza genes que codifican enzimas de origen viral o bacteriano que producen metabolitos tóxicos para las células que los alberga a partir de profármacos o fármacos inactivos. Entre los genes denominados suicidas el mejor caracterizado es el gen de la timidina quinasa perteneciente al virus Herpes Simplex (HSV-tk) que transforma el ganciclovir (GCV) en un compuesto trifosforilado que actúa como un terminador de cadena sobre la síntesis del ADN paralizando la replicación y provocando la muerte celular.

Para la aplicación de este sistema terapéutico se han utilizado vectores adenovirales y retrovirales portadores del gen HSV-tk con objeto de sensibilizar a diversas líneas celulares de hepatocarcinoma a los efectos del GCV, lográndose como consecuencia remisiones tumorales importantes en diversos modelos experimentales5. Sin embargo, se ha observado que la transferencia del sistema HSV-tk/GCV a los hepatocitos normales se asocia al desarrollo de diversos grados de toxicidad hepática. Para evitar estos efectos se han diseñado vectores controlados por promotores específicos de tumor como la a-fetoproteína (aFP) que impiden que el vector aplicado directamente sobre la lesión tumoral o por vía sistémica actúe sobre los hepatocitos normales que no producen aFP.

FUENTE:

GUILLERMO MAZZOLINI, JESÚS PRIETO. Departamento de Medicina Interna. Clínica Universitaria de Navarra, Pamplona. España "TERAPIA GÉNICA DE LOS TUMORES HEPÁTICOS" Disponible en: http://www.medicinabuenosaires.com/revistas/vol61-01/3/tumorehepaticos.htm

STEM CELLS PARA CIRROSIS HEPÁTICA

Ante la necesidad de buscar nuevas fuentes para obtención de hepatocitos adultos, para enfermedades hepáticas, se proponen donantes en asistolia, donante neonatal.
La base actual para TCH reside en transplantar hepatocitos adultos, células ya diferenciadas, sin embargo, las nuevas líneas de investigación están centradas en la obtención de hepatocitos prodecentes de progenitoras de origen hepático o derivados de células madre progenitoras pluripotentes.
Dentro de las células progenitoras de origen hepático se encuentran las progenitoras fetales hepáticas, los hepatoblastos y las células madre progenitoras hepáticas: células ovales, células bipotenciales, ya que se diferencian a colangiocitos y a hepatocitos. Constituyen una reserva de células que proliferan tras un daño hepático masivo y colonizan el parénquima hepático.
Otra opción es la obtención de hepatocitos derivados de células progenitoras pluripotentes procedentes de células madre embrionarias (hSE), células madre de origen mesenquimal, adiposas/medulares, y células madre pluripotentes inducidas

FUENTE
"Estado actual y perspectivas futuras del trasplante de
hepatocitos" Disponible en: http://apps.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=90268851&pident_usuario=0&pcontactid=&pident_revista=36&ty=3&accion=L&origen=zonadelectura&web=zl.elsevier.es&lan=es&fichero=36v92n02a90268851pdf001.pdf

ANIMALES TRANSGÉNICOS: VENTAJAS Y DESVENTAJAS

La transgénesis es un procedimiento biotecnológico por el que se introduce un gen foráneo (transgén) en el genoma de un ser vivo. En la transgénesis se busca que el transgén se integre en la línea germinal (gametos) de una manera estable, asegurando así que ese nuevo gen incorporado pueda ser heredado por la descendencia.

Las técnicas utilizadas para la producción de animales transgénicos son las siguientes:

• Microinyección pronuclear de transgenes en pronúcleos de óvulos fertilizados (cigotos).
• Vectores virales, que transfectan las células integrando en ellas su genoma previamente modificado (virus recombinantes).
• Transferencia de DNA exógeno mediada por esperma durante la fertilización (SMGT, “spermmediated gene transfer“).
• Inyección, en la cavidad de blastocistos, de células madre embrionarias (ES “cells”, “embrionic stem cells”) y/o células germinales embrionarias (EG, embrionic germ cells”), previamente modificadas genéticamente mediante la técnica de “gene targeting”.
• Transferencia nuclear (NT, “nuclear transfer”) con células somáticas, ES o EG que previamente han sido modificadas genéticamente.

Los ratones knockout son los animales de experimentación más utilizados en biomedicina por su fácil manejo y rápida reproducción.

En la actualidad, se dispone de versiones de ratones knockout de unos 10.000 genes, de las que unas 500 constituyen modelos animales de enfermedades humanas.

VENTAJAS:

• Conocer los detalles del funcionamiento de los genes que enfermedades es la clave en la búsqueda de mejores tratamientos, terapias y procedimientos diagnósticos. 
• Resistencia a enfermedades
• Utilización como biorreactores, es decir, como medio de obtención de grandes cantidades de un producto biológico
• Ensayos de seguridad de vacunas y productos quimicos
• Permiten estudiar el desarrollo de las enfermedades en periodos de tiempo mayores y por tanto más realistas.

DESVENTAJAS

• Nuevas proteinas que se expresan cuando se insertan genes de otras especies pueden desencadenar reacciones alérgicas o hipersensibles en algunas personas
• Pocos fetos logran sobrevivir
• Integración múltiple (en tándem o no) 
• Lugar de integración indeterminado (efecto de posición) 
• Metilación y falta de expresión 
• Mosaicismo (germinal y somático) 
• Expresión específica/ectópica 
• Expresión variable 
• Expresión variable dentro de líneas (variegación)

FUENTE

http://es.slideshare.net/cipresdecartagena/animales-transgnicos-2527713

http://geneticabioterio.wordpress.com/animales-geneticamente-modificados/

Maria Ángelez Zuriaga. "Animales transgénicos: usos en biomedicina y alimentación". Disponible en:
http://e-ciencia.com/blog/divulgacion/animales-transgenicos-usos-en-biomedicina-y-alimentacion/

ADN RECOMBINANTE PARA CIRROSIS

La hepatitis crónica es una enfermedad que con el paso del tiempo conlleva a problemas mayores como la disfunción hepatocelular progresiva y destrucción hepática que conduce a cirrosis e insuficiencia hepática.

La vacuna elaborada por ADN recombinante Engeriz, Euvax y HBVax2, está indicada para la inmunización causada contra la infección causada por todos los subtipos de VHB en sujetos en todas las edades que se consideren en riesgo de estar expuestos a VHB, por lo que se deduce que la Hepatitis D causada por la forma delta de este virus se previene mediante la inmunización con esta vacuna

Esta vacuna consiste en una suspensión esteril que contiene el antígeno de superficie del virus purificado obtenido por el método de ADN recombinante absorbido en hidróxido de aluminio

FUENTE:

Heberto Reyes Romero, Pedro Navarro Rojas, Vanessa Romero González, Rosabella Yáñez Gónzalez, Heberto Reyes Barrios, María A. de la Parte. Universidad Central de Venezuela, Facultad de Medicina, Escuela de Medicina Luis Razetti, Cátedras de Pediatría Médica B1
 y Medicina Tropical, Servicio de Imagenología, Hospital José M Vargas y Escuela de Enfermería, Cátedra de Microbiología, Facultad de Medicina, UCV. "Conceptos Recientes Acerca de la Hepatitis B". Disponible en: http://saber.ucv.ve/ojs/index.php/rev_im/article/view/6341/6104

OTRAS TÉCNICAS MOLECULARES PARA DETECCIÓN DE FIBROSIS HEPÁTICA

En el siguiente artículo encontramos una enfermedad relacionada con la fibrosis hepática, como es la  Fasciolasis hepática, otro de los causantes de la Cirrosis Hepática, en el artículo encontramos otro métodos moleculares que se realizan a partir del suero de pacientes principalmente niños de hasta 5 años

• Fas2-ELISA: El ensayo se basa en la detección de anticuerpos IgG circulantes contra el antígeno Fas2 , que es una cisteina proteinasa producida por el parásito Fasciola hepatica

• Western blot para F. hepatica: separó el antígeno en sus diferentes componentes protéicos de acuerdo al peso molecular por electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS al 15%. Luego las proteínas fueron transferidas por electroforesis sobre un papel de nitrocelulosa, donde fue enfrentado con muestras de sueros a la dilución de 1/20 para detectar IgG específico contra el antígeno (E/S) de Fasciola hepatica. Se usó la enzima peroxidasa conjugada con anti-IgG humano a una dilución de 1/1000 para localizar el antígenoanticuerpo. Se determinó el peso molecular de fracciones proteicas del antígeno usando estándares preteñidos comerciales de bajo peso molecular de 3 a 43KD

• Arco 2: Se depositó 3.5ml de solución agar-agar al 1.2% en su fase líquida en una lámina portaobjetos dejando solidificar. Se practicaron perforaciones en que se depositaron: 5µl de solución antigénica (antígeno crudo de Fasciola hepatica), 150µl de suero problema y 50µl de suero control positivo.
• Se colocaron en una cámara húmeda por un lapso de 48horas. Las bandas de precipitación en gel se visualizaron coloreando con Amido Schwarz

FUENTE

MACO FLORES, Vicente et al. Fas2-ELISA y la técnica de sedimentación rápida modificada por lumbreras en el diagnóstico de la infección por Fasciola hepática. Rev Med Hered [online]. 2002, vol.13, n.2 [citado  2014-07-30], pp. 49-57 . Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v13n2/v13n2ao3.pdf

VIDEO GRUPAL "MECANISMOS MOLECULARES PARA CIRROSIS HEPÁTICA"

EPIGENETICA DE CIRROSIS HEPÁTICA

FACTORES AMBIENTALES:

• El consumo excesivo de alcohol
• La hepatitis crónica por virus C (cirrosis por virus C).
• Otros virus, como el de la hepatitis crónica por virus de la hepatitis B y la infección crónica mixta por virus de la hepatitis B y virus de la hepatitis D.
• Enfermedades colestásicas crónica, tales como la cirrosis biliar primaria o la colangitis esclerosante primaria.
• Enfermedades metabólicas congénitas del hígado

FACTORES GENÈTICOS

El gen humano PNPLA3 predice posible gravedad de la enfermedad del hígado causada por alcohol en mestizos mejicanos. 

En octubre se ha publicado en el Journal of Hepatology un estudio en el que se determinaba si el análisis del PNPLA3 es también de utilidad en pacientes europeos caucasianos con enfermedad hepática por alcohol.

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN PARA CIRROSIS HEPÁTICA

Los eventos moleculares encontrados en la cirrosis hepática implican: acumulo de laminina α-1, tenascina y fibronectina, con la sucesiva activación y proliferación de células estelares hepáticas (HSC) inducida mediante la secreción autocrina y paracrina de citocinas tales como: el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento transformante β tipo 1 (TGF-β1). Las HSC activadas (HSCa) conducen a un incremento en los depósitos de proteínas de matriz extracelular (MEC), fundamentalmente colágenas tipo I, III y IV en el espacio perisinusoi-dal o «de Disse», lo que dificulta el intercambio de substancias entre el sinusoide y los hepatocitos.

La activación de las HSC presentes en el espacio subendotelial (espacio de Disse) que inducen una exacerbada expresión de proteínas fibrilares (principalmente colágena tipo I, III y VI) y una disminución en la actividad de enzimas (conocidas como metaloproteasas) que degradan dichas proteínas colagénicas, ocasionan una alteración en el intercambio de sustancias entre el sinusoide y los hepatoci-tos para ser metabolizadas son sólo algunos de los mecanismos involucrados durante el desarrollo de la cirrosis en el hígado.

Para mayor información de los eventos moleculares que pueden producir una Cirrosis hepática a parte de factores externos como el alcoholismo se adjunta el link del articulo correspondiente

http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872007000600015&script=sci_arttext

ALTERACIONES EN LA TRANSCRIPCIÓN DEL ADN

El polimorfismo del gen PNPLA3 confiere mayor riesgo de cirrosis y daño en el hígado en la enfermedad hepática por alcohol

Se sabe que el análisis del gen humano PNPLA3 puede predecir la posible gravedad de la enfermedad del hígado graso. Además, se ha demostrado que el análisis del gen PNPLA3 predice también la posible gravedad de la enfermedad del hígado causada por alcohol en mestizos mejicanos. En octubre se ha publicado en el Journal of Hepatology un estudio en el que se determinaba si el análisis del PNPLA3 es también de utilidad en pacientes europeos caucasianos con enfermedad hepática por alcohol.

Incluyeron 328 personas sanas y 330 pacientes (entre ellos 265 con cirrosis) y se les analizó en sangre el gen PNPLA3. Este análisis puede dar tres resultados: C-C, C-G y G-G. Comprobaron que el alelo G se detectaba más frecuentemente en los pacientes que en los controles sanos y esto se asociaba con una mayor cantidad de grasa en el hígado, con fibrosis y cirrosis hepática. En el estudio estadístico se comprobó que el polimorfismo del gen PNPLA3 es el mejor factor predictivo de la evolución de la enfermedad.

En conclusión, el análisis del gen PNPLA3 es de gran utilidad para predecir la evolución de la enfermedad de hígado causada por alcohol e incluso, para decidir la frecuencia e intensidad del control clínico al que debe someterse el paciente.

http://www.fehv.org/noticia21.htm

ALTERACIONES EN LA REPLICACIÓN DEL ADN

PARA CIRROSIS:
Esta enfermedad al no ser un síndrome de alteración genético, es decir una mutación, no se la va a considerar para llevar a cabo la actividad de esta semana, pues es una enfermedad causada por agente externos como alcohol, sin embargo, existe un tipo de cirrosis conocida como "Cirrosis Hepática Primaria" que es una enfermedad crónica progresiva del hígado causada por una paulatina destrucción de los conductos biliares intrahepáticos. Aunque puede conducir lentamente a una cirrosis hepática, no todos los pacientes la desarrollan. Su causa es desconocida. Aparece una reacción del sistema inmune (de defensa) contra el propio hígado (reacción autoinmune), quizás producida por agentes externos en personas predispuestas.

PARA NEUROFIBROMATOSIS

La neurofibromatosis es un trastorno genético del sistema nervioso. Afecta principalmente la formación y el crecimiento de las células nerviosas. Provoca el crecimiento de tumores en los nervios. Aún no se sabe completamente porqué estos tumores siguen produciéndose, pero parece estar principalmente relacionado con las mutaciones en los genes que juegan papeles clave en la supresión del crecimiento tumoral en el sistema nervioso. Estas mutaciones hacen que los genes, identificados como NF1 y NF2, dejen de producir proteínas específicas que controlan la producción celular. Sin estas proteínas, las células se multiplican fuera de control y forman tumores.

Existen tres tipos de neurofibromatosis:

• Tipo 1 (NF1), que provoca cambios en la piel y deformidades en los huesos y suele comenzar en el nacimiento.
• Tipo 2 (NF2), que causa pérdida del oído, sonidos en los oídos y problemas de equilibrio. Suele comenzar durante la adolescencia.
• La schwanomatosis provoca un dolor intenso. Es el tipo más raro.

No existe una cura. El tratamiento se enfoca en controlar los síntomas. Dependiendo del tipo de enfermedad y de su gravedad, el tratamiento puede incluir cirugía para extirpar tumores, radioterapia y medicinas.

FUENTE:

http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1130-01082007000600011

http://espanol.ninds.nih.gov/trastornos/las_neurofibromatosis.htm

USO DE PCR PARA CIRROSIS HEPÁTICA

ESTUDIO DE LA ASOCIACIÓN ALÉLICA ENTRE LOS POLIMORFISMOS DE LOS GENES DE COLÁGENA TIPO 1 (COLIA1 Y COLIA2) Y DAÑO HEPÁTICO ALCOHÓLICO

De los individuos que abusan del alcohol y presentan hígado graso solo un pequeño porcentaje genera inexorablemente un daño hepático grave ya sea cirrosis o hepatitis alcohólica.

Los factores genéticos que predisponen a un individuo a sufrir un daño hepático están íntimamente asociados con la producción de Colágena tipo I que es la proteína que predomina en casos de Cirrosis, por esta razón, los genes que codifican para esta proteína se consideran como "candidatos" importantes en el estudio de la predisposición genética a esta enfermedad. 

El objetivo del presente articulo es analizar los polimorfismos para los genes humanos de colágena tipo I, como son el COLIA1 y COLIA2 en muestras de individuos alcohólicos que presentan o no cirrosis para probar la hipótesis de la relación entre la expresión de los genes antes mencionados y el desarrollo de Cirrosis Hepática

Se analizaron los genotipos de 3 diferentes polimorfismos (dos en el gene COLIA1 y uno en el COLIA2), mediante la amplificación de las regiones correspondientes por PCR. 

FUENTE:
http://inprf.bi-digital.com:8080/bitstream/123456789/1765/1/sm210424.pdf

Pruebas para diagnóstico

PRUEBAS DE TAMIZAJE

*Examen físico.- Para encontrar el hígado con anormalidades en la forma o tamaño.

*Conteo sanguíneo completo (CSC).- Para buscar problemas de anemia.

*Pruebas de la función hepática.- Para ver como está funcionando el hígado.

*Ecografía, resonancia magnética o tomografía del abdomen.

Ecografía abdominal: el hígado esta retraído y marcadamente disminuído de tamaño. La superficie es irregular y nodular. Hay abundante ascitis que rodea al hígado que aparece inmerso en líquido

PRUEBAS DE CONFIRMACIÓN

- Pruebas de sangre.

- Endoscopia.

- Biopsia del hígado.- Es la prueba más usada para confirmación de cirrosis hepática.

FUENTE

http://medicinadepostgrado.com/infopoems/gastroenterologia/consulta/cirrosis.htm
http://www.mayoclinic.org/espanol/enfermedades-y-tratamientos/cirrhosis-del-higado/diagnostico

http://escuela.med.puc.cl/publ/AtlasRadiologia/Data/patologia/hdhc.htm

¿Qué es la Cirrosis Hepática?

Es una enfermedad causada por alteraciones estructurales en el hígado, entre éstas alteraciones encontramos: 

• Necrosis hepatocelular.
• Fibrosis.
• Nódulos de regeneración

Las tres alteraciones juntas conducen a una alteración de la arquitectura vascular y la función normal del hígado.

       *LA NECROSIS HEPATOCELULAR: Muerte celular por daño continuo del hígado que produce la enfermedad

        *FIBROSIS:Es una consecuencia del proceso de cicatrización producido por las lesiones inflamatorias, que ocurren en el hígado, de manera que, con el paso de los años, el hígado se convierte en un órgano con gran cantidad de tejido cicatrizado alterando por completo su estructura normal; como consecuencia, las células nuevas generadoras para sustituir a las desaparecidas no pudieron colocarse en el lugar adecuado y se sitúan donde se permite el trauma de cicatrices que surcan el hígado

Además esta fibrosis, produce un segundo efecto que es cerrar y endurecer, los pequeños vasos sanguíneos , por el que circulan la sangre a través del Hígado.

*NÓDULOS DE REGENERACIÓN:Grupos de células hepáticas rodeadas de fibras colágenas (de cicatrices ), formando Nódulos.

ETIOLOGÍA

Las causas que pueden desencadenar un estado de Cirrosis Hepática son múltiples como:

• Hepatitis Alcoholica.
• Virus B y C.
• Hemocromatosis.
• Enfermedad de Wilson.
• Glucogénesis tipo IV.
• Galactosemia.
• Amiloidosis.
• Déficit de alfa 1 antitripsina.
• Tirosinemia hereditaria.
• Porfiria cutánea tarda
• COLESTASIS PROLONGADAS

Fuente:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000255.htm

http://www.facmed.unam.mx/deptos/anatomia/computo/higado/cirrohepatica.html

INTRODUCCIÓN

Escogí esta enfermedad puesto que es una de las principales muerte de morbilidad y mortalidad en el Ecuador, ocupando el 7mo puesto de las 10 más importantes; además de que afecta a un órgano vital como es el hígado y del cual la mayoría de personas desconocemos su funcionalidad y por esta razón lo descuidamos por completo cuando comemos en exceso, o abusamos de bebidas alcohólicas como si no fuesen a repercutir en el funcionamiento normal de nuestro organismo. Además me parece importante informar a la comunidad sobre esta afección ya que conociendo las fatales consecuencias que ésta enfermedad puede llegar a ocasionar creo que se haría consciencia por mejorar el estilo de vida que llevamos y logrando así una mejoría de nuestra salud

Andrea D. Basantes C.
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